Eletroforese em gel

Uma técnica usada para separar fragmentos de DNA e outras macromoléculas por tamanho e carga.
A eletroforese em gel é uma técnica usada para separar fragmentos de DNA de acordo com seu tamanho.
As amostras de DNA são carregadas nos poços (indentações) em uma extremidade de um gel e uma corrente elétrica é aplicada para puxá-las através do gel.
Os fragmentos de DNA são carregados negativamente, então eles se movem em direção ao eletrodo positivo. Como todos os fragmentos de DNA têm a mesma quantidade de carga por massa, pequenos fragmentos se movem pelo gel mais rapidamente que os grandes.
Quando um gel é corado com um corante de ligação ao DNA, os fragmentos de DNA podem ser vistos como bandas , cada uma representando um grupo de fragmentos de DNA do mesmo tamanho.

O que é um gel?

Como o nome sugere, a eletroforese em gel envolve um gel: uma placa de material semelhante a gelatina. Os géis para a separação do DNA são geralmente feitos de um polissacarídeo chamado agarose , que vem em pó. Quando a agarose é aquecida em um tampão (água com alguns sais) e deixada esfriar, formará um gel sólido e levemente mole. No nível molecular, o gel é uma matriz de moléculas de agarose que são mantidas juntas por ligações de hidrogênio e formam pequenos poros.

Preparação do gel

Pesar a massa apropriada de agarose em uma balança analítica. Os géis de agarose são preparados usando uma solução percentual w / v. A concentração de agarose em um gel dependerá do tamanho dos fragmentos de DNA a serem separados, com a maioria dos géis variando entre 0,5% e 2%. O volume do tampão não deve ser maior que 1/3 da capacidade do balão.

Adicione o tampão de corrida ao balão contendo agarose. Agite para misturar. Os tampões de corrida em gel mais comuns são TAE (Tris-acetato 40 mM, EDTA 1 mM) e TBE (Tris-borato 45 mM, EDTA 1 mM).

Derreta a mistura agarose / tampão. Isso geralmente é feito por aquecimento no microondas, mas também pode ser feito com uma chama de Bunsen. Em intervalos de 30 s, retire o balão e agite o conteúdo para misturar bem. Repita até que a agarose se dissolva completamente.

Adicionar corante safer a uma concentração de 0,5 μg / ml. Alternativamente, o gel também pode ser corado após eletroforese em tampão de corrida contendo 0,5 μg / ml de EtBr por 15 a 30 min, seguido de descoloração em tampão de corrida por um período de tempo igual.

Deixe a agarose esfriar na bancada ou por incubação em banho-maria a 65 ° C. Caso contrário, entortará a bandeja de gel.

Coloque a bandeja de gel no aparelho de fundição. Alternativamente, pode-se também colar as bordas abertas de uma bandeja de gel para criar um molde. Coloque um pente apropriado no molde de gel para criar os poços.

Despeje a agarose derretida no molde de gel. Deixe a agarose ficar em temperatura ambiente. Retire o pente e coloque o gel na caixa de gel. Como alternativa, o gel também pode ser embrulhado em filme plástico e armazenado a 4 ° C até o uso.

Equipamentos para Eletroforese

Aqui na Minas Labor Ltda. você encontra os principais equipamentos e acessórios para eletroforese, confira:

CUBAS PARA ELETROFORESE

FONTES PARA ELETROFORESE

TRANSILUMINADOR

ACESSÓRIOS: ESPAÇADORES, ESPATULAS, PLACAS DE VIDRO PENTES E REAGENTES.

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